ELISA样本制备指南及注意事项

ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。

样本制备指南

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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品

2.血浆

不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。

试管icsi补救后不会让胚胎质量变好，icsi补救方案只是为了提高精卵结合率，对于改变胚胎质量没有关系。icsi方案是在正常的试管治疗周期中，精子和卵子出现不结合的情况，选择单精子注射技术（icsi）进行补救，将活力强、正常形态的精子直接注射到卵细胞中，帮助受精。这项技术只会在受精方面有优势，并不能提升胚胎的质量。

临床上针对不明原因不孕或者其他可能存在受精失败的情况，会采取icsi方案进行补救，这一技术克服了精卵结合失败的局限性，能够帮助单一精子和卵子受精，大大的提高了受精率，下面可以详细了解一下试管icsi补救方案：

1.icsi补救方案在一代试管婴儿技术的基础上增加了单精子显微注射技术（icsi），在精子和卵子受精阶段，适用显微操作通过人工的方式将精子卵子结合，可以提高精子卵子结合受精率；

2.icsi补救方案是将精子直接注射到卵胞质内，绕过了自然受精等诸多环节，提高的精子和卵子的受精率，但是并不是说补救了就一定会怀孕，还需要考虑其他的众多因素；

3.只是在受精方面有所优势，并不能提升试管婴儿的胚胎质量，因为即使精卵受精成功，但并不意味着可以保证胚胎的基因健康，还有其他因素会影响胚胎质量。